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园艺论文_农杆菌介导的杜梨叶片瞬时转化方法

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文章摘要:【目的】寻找一种由农杆菌介导的杜梨叶片瞬时转化的最佳方法【方法】以杜梨组织培养的幼嫩叶片为材料，将含有GUS基因的pBI121植物表达载体转化农杆菌GV3101和EHA105，设计3因子3水平正交试验L9(3³)，采用不同农杆菌菌液浓度，不同真空渗入时间，侵染叶片组织细胞，取不同时间共培养后的叶片观察GUS染色情况【结果】GV3101和EHA105均能高效侵染转化杜梨叶片，使GUS蛋白表达，但其转化效率不同。农杆菌GV3101在菌液OD₆₀₀为0.8，真空渗入20min，共培养4d后，杜梨叶片的转化效率即可达到100%，且叶片坏死率仅为13.09%；EHA105在OD₆₀₀为0.8，真空渗入30min，共培养6d，或菌液OD₆₀₀为1.0，真空渗入10min，共培养2d的条件下转化效率最高，均为83.33%，但是，叶片坏死率分别为27.78%和15.26%，然而在菌液OD₆₀₀为1.0，真空侵染时间20min，共培养4d后，叶片转化效率为75.79%，但叶片坏死率大大降低，仅为5.00%。【结论】菌株GV3101和EHA105均能高效侵染转化杜梨叶片，最高转化效率分别为100%和83.33%，所以菌株GV3101转化效率高于EHA105。考虑到叶片坏死率，菌株GV3101瞬时转化杜梨叶片的最适条件为：菌液OD₆₀₀为0.8，真空渗入时间20min，共培养4d，转化效率100%，叶片坏死率13.09%；菌株EHA105瞬时转化杜梨叶片的最适条件为：菌液OD₆₀₀为1.0，真空渗入20min，共培养4d，转化效率75.79%，叶片坏死率5.00%。

文章关键词:杜梨,组织培养,叶片,农杆菌,瞬时转化,β-葡糖醛酸酶,

项目基金:国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-28-9）,

论文作者:李刚¹ 宋平丽¹ 王翔¹ 马青翠¹ 张海霞¹ 张玉星¹ 许建锋¹

论文DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20210187

论文分类号: S661.2

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